第二节　羊肚菌菌种生产、营养袋制作与出菇试验

一、菌种生产

羊肚菌菌种最大的缺点就是容易退化、变异，给羊肚菌栽培带来很大困难。为了解决这些问题，每年羊肚菌菌种都需要分离、提纯和做出菇试验，并且需要妥善保管、运输，控制菌种传代。菌种生产流程如下：羊肚菌选择和采集→组织（孢子）分离→提纯培养→出菇试验→优良一级菌种→复壮培养、菌种扩繁→二级菌种→接种、培养栽培菌种。

1．菌种分离

羊肚菌的分离方法与其他食用菌大体相同，采用组织分离和孢子分离。

（1）组织分离 选取成熟、具优良长势的羊肚菌子实体，在无菌环境中用接种针将组织块接入平皿培养基上，获得菌种。

① 培养基制作。配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18～20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、水1000ml。将培养基装到500ml三角瓶中（每瓶装入200ml），115℃灭菌30min后在无菌条件下将培养基倒入平皿中（每个平皿约20ml），冷却备用。

② 选取头潮、新鲜、健壮、周围幼菇或

原基多、朵形圆整、七八分熟的子实体（图1-10）。

③ 菇面用75%酒精棉球擦拭消毒。

④ 切取组织块（菌肉）。用手术刀切开种菇（图1-11），在菌盖或菌柄内侧用无菌手术刀或尖嘴镊子取5mm见方组织块（菌肉）接于培养基上（图1-12）。

⑤ 培养。温箱18℃恒温培养，2天后组织块萌发（图1-13），待菌落长到2cm（图1-14），用接种针选取最优菌落的先端菌丝接入新培养基，进行尖端脱毒。将菌丝生长快、产菌核适中、产色素少且晚的分离物挑选出来，作为第一代母种保存备用。

除菌丝尖端脱毒法外还可采用断桥脱毒法。在无菌条件下，用接种针把平皿培养基中间培养基断开1cm，把菌种接在断开培养基一侧（图1-15、图1－16），菌丝穿越断开处，伸入前端的培养基上，可以纯化菌种。

（2）孢子分离 在无菌条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得纯培养的方法。多孢分离的菌株不能直接用于生产，要经过出菇试验。采集孢子有多种方法，如整朵插种菇、三角瓶钩悬和试管琼脂培养基黏附法等，此处介绍整朵插种菇法。

① 选取头潮、新鲜、健壮、八九分成熟的子实体。

② 采集孢子。将按照组织分离方法消毒子实体的整朵菇插入无菌孢子收集器里，在18℃下培养2～3天后子囊孢子落下，形成孢子印（图1-17） 。

③ 孢子分离、培养。无菌条件下，将少量孢子移入盛无菌水的三角瓶内稀释成孢子悬浮液，其浓度以1滴水中含5～10个孢子为宜。用接种环取孢子悬浮液在斜面上划线，孢子萌发后菌丝体长在一起。取菌丝块转接新的平皿培养基上，18℃避光培养（图1-18）。选取菌丝生长快，菌核数量适中，产生色素少且晚的培养物用于栽培试验。

2．母种扩大繁殖及保藏

（1）母种扩大繁殖 选取无污染菌丝优良的试管菌种，用接种针划取带培养基的小块菌种接到斜面培养基中（图1-19），一般1支母种第一次扩接15～20支。将转接的菌种放在18℃培养箱中避光培养7天，待菌丝长满试管斜面后备用。母种转代尽量不要超过3代。

（2）优质母种质量标准 菌丝长势均匀，开始是白色，后来慢慢变成黄色，无杂菌污染，表明菌丝生长良好（图1-20、图1-21）。

（3）母种的保藏 放入冰箱3～5℃保鲜层保存，但时间最长不超过3个月。

3．原种和栽培种制作

（1）常用配方

① 木屑30%，稻壳30%，小麦20%，腐殖土20%。

② 木屑65%，小麦20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，腐殖土12%。

③ 玉米芯40%，木屑30%，小麦15%，石膏1%，过磷酸钙1%，腐殖土13%。

④ 木屑40%，棉籽壳30%，小麦15%，石膏1%，过磷酸钙1%，腐殖土13%。

以上每个配方最后都需要加入原料用量1%的石灰。

（2）制作方法 小麦浸泡或煮涨，木屑发酵3个月以上，再加入煮涨的小麦、湿土及其他材料，将配方混合均匀后，加入清水，使含水量达55%～65%时即可装料。原种一般采用500～750ml的玻璃瓶，装瓶要求上下松紧一致，用薄膜封口就行。栽培种一般用（15～18）cm×33cm的聚丙烯折角袋装料，无棉盖封口。高压灭菌在1.5MPa下维持4h，常压灭菌在100℃以上保持10～12h，注意灭菌时间不能过长，压力不能过高，否则会破坏其中的养分。高压灭菌见图1-22。

（3）培养 在无菌条件下，每支母种可

接原种3～5瓶，每瓶原种可接40～60袋栽培种，接种后放在18～22℃条件下暗光培养。3天菌丝开始萌发吃料，10天菌丝可布满培养基表面，15～20天可长满。在培养期间要尽量避免强光刺激，菌龄不超过30天为好。

合格的羊肚菌菌种应该菌丝生长均匀、迅速，无污染；在瓶肩部或料与瓶的缝隙处产生菌核，菌核初期白色，后期为金黄色至浅褐色的颗粒状（图1-23～图1-26）。菌丝太弱、菌丝老化、含杂菌者不能用。

二、营养袋制作

（1）营养袋规格 营养袋有2种规格，一般用12cm×24cm或14cm×28cm的折角袋装料。

（2）营养袋配方 营养袋的配方很多，以下配方供参考。

① 稻壳40%，小麦60%。另加占总料1%的石灰。

② 玉米芯30%，稻壳20%，小麦50%。另加占总料1%的石灰。

③ 木屑30%，玉米芯20%，小麦40%，麸皮9%，过磷酸钙1%。另加占总料1%的石灰。

（3）制作方法 原材料的预处理方法和做菌种时一样，将配方混合均匀后，使含水量达55%～65%时即可装料。将装好料的营养袋用专用扎口机或者塑料绳扎口，然后装入编织袋或筐内，放入灭菌柜内灭菌。高压灭菌在1.5MPa下维持6h，常压灭菌在100℃以上保持18～20h，灭完菌冷却后使用（图1-27、图1-28）。

三、出菇试验

羊肚菌是子囊菌，多次扩大繁育的菌种较易发生变异，不经出菇试验，直接用于大量生产，就有可能导致子实体生产率降低，甚至绝收。下面简单介绍一下室内出菇试验。

① 播种（图1-29、图1-30）。

② 菌丝生长、形成菌霜（图1-31、图1-32）。

③ 放营养包。放12cm×24cm菌袋制作的营养包，营养包倒放土上，压实使袋内营养料紧贴菌丝（图1-33）。

④ 出菇（图1-34～图1-36）。

（罗金洲 编写）